免疫共沉淀實驗

簡要描述：

免疫共沉淀實驗（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。

更新時間：2024-10-15

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免疫共沉淀實驗
當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。

免疫共沉淀實驗（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是一種經(jīng)典的生物化學技術，用于研究蛋白質之間的相互作用。其原理主要基于抗體和抗原之間的專一性結合作用。以下是對免疫共沉淀原理的詳細解釋：

一、基本原理

?抗體與抗原的專一性結合?：免疫共沉淀利用抗體能夠特異性地識別并結合其對應抗原的特性。這種專一性結合是免疫共沉淀技術的基礎。
?細胞裂解?：首先，細胞需要在非變性條件下被裂解，以保留細胞內蛋白質之間的相互作用。這樣，原本在細胞內相互結合的蛋白質在裂解后仍然保持結合狀態(tài)。
?抗體與靶蛋白的結合?：將特異性的抗體加入到細胞裂解液中，抗體將與裂解液中的靶蛋白（即已知或待研究的蛋白質）形成抗原-抗體復合物。
?復合物沉淀?：如果系統(tǒng)中存在與靶蛋白相互作用的蛋白質（稱為結合蛋白），這些結合蛋白也會與靶蛋白-抗體復合物結合，形成更大的蛋白質復合物。隨后，通過離心或其他物理方法，可以將這些復合物沉淀下來。

二、實驗步驟（簡要）

?細胞裂解?：在非變性條件下裂解細胞，獲取細胞裂解液。
?抗體結合?：在細胞裂解液中加入特異性的抗體，使抗體與靶蛋白結合形成復合物。
?沉淀復合物?：通過離心或其他方法將蛋白質復合物沉淀下來。
?洗脫與分析?：對沉淀物進行洗脫，去除非特異性結合的雜質，然后進行SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳）及Western blotting等分析，以確定與靶蛋白相互作用的蛋白質。