光老化動物模型構建服務
一、光老化背景簡介
皮膚衰老是一個由基因和外界環境因素等共同作用下的結果。皮膚老化根據影響因素的不同分為內源性老化和外源性老化。內源性老化是指基因層面的隨著時間推移產生的自然老化。外源性老化是指環境因素如紫外線輻射、吸煙、毒害化學品等影響下產生的皮膚損害積累，其中紫外線輻射是導致外源性老化最主要的因素。因此，外源性老化又稱為皮膚光老化。建立有效的皮膚光老化動物模型，是研究及防治人體皮膚光老化的基礎。
二、光老化模型簡介
皮膚光老化動物模型的設計思路主要是模擬真實的紫外照射情況。日光中的紫外線（ultraviolet，UV）分為3個波段：短波紫外線（UVC，190～290 nm）、中波紫外線（UVB，290～320 nm）和長波紫外線（UVA，320～400 nm）。其中UVC幾乎全被臭氧層吸收，到達地面的主要為 UVA 和 UVB；UVA 的活性很低，而UVB活性是UVA活性的1000倍。UVB 主要導致皮膚表皮層和真皮淺層的損傷，可引起皮膚松弛、干燥、粗糙、皺紋加深、色素沉著等，甚至可以導致皮膚癌。因此皮膚光老化模型一般使用采用窄譜UVB（311～312 nm）作為紫外照射光源。
三、光老化動物模型構建服務的方法
1. 實驗動物
10-12周雌性裸鼠
2. 實驗設備
311nm的UVB紫外燈管（安裝在自制紫外照射箱中，紫外燈距離小鼠背部約30cm）。紫外照度計用于監測 輻照度。
3.實驗流程
造模時間共計八周，間隔一天進行紫外照射，流程如下表：
周 | 周一、三、五、七，每次60mJ/cm2 |
第二周 | 周二、四、六， 每次60mJ/cm2 |
第三周 | 周一、三、五、七，每次120mJ/cm2 |
第四周 | 周二、四、六，每次180mJ/cm2 |
第五周 | 周一、三、五、七，每次240mJ/cm2 |
第六周 | 周二、四、六，每次240mJ/cm2 |
第七周 | 周一、三、五、七，每次240mJ/cm2 |
第八周 | 周二、四、六，每次240mJ/cm2 |
4.光老化模型鑒定
4.1 一般狀態及皮膚宏觀評價
隔日觀察裸鼠的一般狀態，如食量、精神狀態等。同時，對裸鼠背部皮膚與光老化相關的宏觀特征（如皺紋、增厚、粗糙、彈性、紅斑等）進行觀察評價，并對其背部皮膚進行拍照記錄。根據下表所示皮膚光老化評分標準對其背部皮膚進行宏觀評分。
4.2 皮膚彈性測試
根據 Tsukahara 等人建立的提皮測試方法對裸鼠皮膚彈性進行評價，每四周一次，共檢查兩次。用拇指和食指將裸鼠背部皮膚沿正中線靠后的位置輕輕提起（以裸鼠四肢不懸空為度）后立即放開，并記錄皮膚恢復至初始狀態的時間[8]。
4.3 皮膚組織學檢測
4.3.1 HE 檢測：表皮組織結構觀察及厚度測量
皮膚組織經 HE 染色后，光學顯微鏡下觀察皮膚組織角質層、表皮層和真皮層結構及細胞層數；觀察毛囊、汗腺、皮脂腺等附屬器官的形態；以及觀察是否有出血現象及炎性細胞浸潤等。
4.3.2 Masson 檢測：膠原纖維的分布及形態觀察
皮膚組織經 Masson 染色后，光學顯微鏡下觀察顯示膠原纖維呈藍色，胞質、肌纖維和紅細胞紅色，胞核藍褐色。觀察膠原纖維的含量、形態及分布的變化情況。
四、小結：
選用311nm的UVB紫外線燈照射8周可以成功建立小鼠皮膚光老化模型。模型組小鼠的皮膚肉眼可見變紅、松弛、粗糙、色素沉著、皺紋增加等； 病理觀察可發現表皮增厚，膠原纖維含量減少， 排列紊亂等現象。
五、參考文獻
[1]GARRE A, NARDA M, VALDERAS-MARTINEZ P, et al. Antiaging effects of a novel facial serum containing L-Ascorbic acid,proteoglycans,and proteoglycanstimulating tripeptide:ex vivo skin explant studies andin vivo clinical studies in women[J]. Clin Cosmet Investig Dermatol, 2018, 11:253-263.
[2]孔悅, 郭硯. 皮膚光老化小鼠模型的構建及效果評估[J]. 實驗動物與比較醫學, 2021, 41(2):6.
[3]吳斯敏, 楊慧齡. 紫外線引起皮膚光老化機制及防治的研究進展[J]. 醫學綜述, 2018, 24(2):341-346.
[4] OLIVEIRA M M, RATTI B A, DAR R G, et al. Dihydrocaffeic acid prevents UVB-induced oxidative stress leading to the inhibition of apoptosis and MMP-1 expression via p38 signaling pathway[J]. Oxid Med Cell Longev, 2019, 2019:2419096.
[5]龔婕, 馬良娟. 皮膚光老化和抗氧化劑研究進展[J]. 中國麻風皮膚病雜志, 2019, 35(11):692-695.
[6]王秀芬. 廣藿香酮,亞硫酸氫鈉cxl內酯抗小鼠皮膚光老化作用[D]. 廣州中醫藥大學, 2016.
