一、手足口病動物模型構建實驗動物選擇
1. 常用動物模型及特點
| 動物模型 | 適用病毒 | 優點 | 缺點 | 適用研究 |
|---|---|---|---|---|
| 乳鼠（1-3日齡） | EV-A71、CV-A16 | 高敏感性、可致死 | 年齡限制大 | 病毒致病性、藥物篩選 |
| 幼齡倉鼠（<2周） | EV-A71 | 可模擬神經癥狀 | 需適應毒株 | 神經侵襲機制 |
| 人SCARB2轉基因小鼠 | EV-A71 | 支持病毒復制 | 需基因修飾 | 疫苗評價 |
| 樹鼩（Tree Shrew） | CV-A16 | 部分模擬人類癥狀 | 來源受限 | 免疫應答研究 |
| 非人靈長類（如獼猴） | EV-A71 | 接近人類感染 | 成本高、倫理限制 | 臨床前試驗 |
2. 選擇依據
研究病毒毒力 → 乳鼠模型（快速、低成本）
研究神經致病性 → 幼齡倉鼠 或 SCARB2-Tg小鼠
疫苗/藥物評價 → 樹鼩 或 靈長類
二、手足口病動物模型構建病毒株準備
1. 常用HFMD相關病毒
EV-A71（C4亞型、B5亞型等）
CV-A16（主要致輕型HFMD）
CV-A6、CV-A10（新興流行株）
2. 病毒擴增與滴定
細胞培養：
RD細胞（橫紋肌肉瘤細胞，用于EV-A71/CV-A16）
Vero細胞（用于部分CV-A6株）
病毒滴度測定：
TCID??（細胞病變法）
噬斑試驗（PFU/mL）
三、感染途徑與劑量
1. 感染方式
| 途徑 | 方法 | 適用模型 | 特點 |
|---|---|---|---|
| 顱內注射（IC） | 直接腦內接種（乳鼠5μL） | 乳鼠 | 強制神經侵襲 |
| 腹腔注射（IP） | 病毒懸液注射 | 乳鼠、倉鼠 | 系統性感染 |
| 肌肉注射（IM） | 后肢肌肉接種 | 乳鼠 | 模擬自然感染 |
| 鼻腔接種（IN） | 滴鼻感染 | 幼倉鼠、樹鼩 | 呼吸道傳播 |
2. 感染劑量
乳鼠（EV-A71）：
顱內注射：103–10? TCID??
腹腔注射：10?–10? TCID??
SCARB2-Tg小鼠：10? PFU（肌肉注射）
樹鼩（CV-A16）：10? TCID??（鼻腔接種）
四、模型評估指標
1. 臨床癥狀
乳鼠：
肢體麻痹、弓背、體重下降（>15%需安樂si）
致死率（感染后5–7天觀察）
倉鼠/樹鼩：
足墊紅腫、行動遲緩
神經癥狀（震顫、抽搐）
2. 病毒學檢測
組織病毒載量（qPCR檢測病毒RNA）：
腦、脊髓、肌肉、腸道
病毒分布：免疫組化檢測病毒抗原（如EV-A71 VP1）
3. 病理學分析
中樞神經系統：
腦干、脊髓前角神經元壞死（HE染色）
小膠質細胞激活（Iba1免疫染色）
肌肉組織：肌纖維變性、炎癥浸潤
4. 免疫應答
體液免疫：ELISA檢測中和抗體（如抗-EV-A71 IgG）
細胞免疫：
流式檢測CD4?/CD8? T細胞浸潤
細胞因子（IL-6、TNF-α）水平
五、注意事項
1. 生物安全
EV-A71需在 BSL-2 實驗室操作，動物尸體需高壓滅菌。
2. 動物福利
乳鼠模型需密切監測（每12小時記錄癥狀）。
設置人道終點（如癱瘓、體重下降>20%）。
3. 對照設置
陰性對照：PBS或滅活病毒接種
陽性對照：已知高毒力株（如EV-A71 C4）
六、常見問題與優化
1. 乳鼠模型個體差異大
解決方案：
使用同窩幼鼠，增加樣本量（每組≥8只）
標準化接種體積（顱內注射≤5μL）
2. 成年動物不敏感
策略：
使用免疫抑制劑（如環lin酰胺）
選擇轉基因動物（如SCARB2-Tg小鼠）
3. 缺乏自然傳播模型
替代方案：
共飼養感染與未感染乳鼠（通過糞便/唾液接觸）
氣溶膠暴露倉鼠（需專用設備）
