一、胞質注射實驗技術定義與核心原理
胞質注射是顯微注射技術的一種，通過顯微操作系統將外源基因直接注入細胞質（而非細胞核），實現基因導入。其核心機制包括：
非整合性表達：外源DNA以游離體形式存在，通過細胞自身轉錄機制表達，不整合至宿主基因組（區別于原核注射的隨機整合）。
適用性廣：可操作單細胞（如原代細胞、干細胞）及多細胞胚胎（如2細胞期胚胎）。
瞬時表達為主：外源基因隨細胞分裂逐漸丟失，表達周期較短（通常<72小時）。
生物學基礎：
依賴細胞質內的轉錄因子與RNA聚合酶完成外源基因表達，無需核定位信號（NLS）介導。
二、標準化操作流程
（一）設備與材料準備
| 組件 | 參數要求 | 功能說明 | 引用來源 |
|---|---|---|---|
| 顯微操作系統 | 微操縱器精度0.1μm，注射針內徑<0.5μm | 精準控制注射位置與深度 | |
| 外源DNA溶液 | 濃度1-5 ng/μL，溶于低離子強度緩沖液（如TE） | 減少細胞毒性，提升表達效率 | |
| 靶細胞類型 | 原代角質形成細胞、HEK-293T、早期胚胎等 | 需具備較強DNA攝取與表達能力 |
（二）操作步驟
關鍵參數：
注射壓力：5-10 hPa（過高導致細胞破裂）。
注射時長：單細胞≤30秒，避免細胞脫水。
存活率控制：熟練操作下細胞存活率>80%，胚胎存活率>70%。
（三）表達驗證方法
熒光標記法：
注射含GFP/RFP報告基因的載體，24小時后熒光顯微鏡觀察。
蛋白檢測法：
Western Blot或免疫組化檢測目標蛋白表達。
胞質注射實驗
